諾博萊德 2x SYBR qPCR Mix（With 50x ROX）熒光定量

2x SYBR qPCR Mix（With 50x ROX） 

目錄號：71311

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 24 個月, 使用前充分融解，輕柔顛倒混勻。短期使用可放在 4 ℃，避免反復凍融。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品簡介

2x SYBR qPCR Mix是SYBR I 嵌合染料法專用的qPCR試劑，為2x 預混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟，縮短加樣時間，降低污染幾率。其核心組分是全新的抗體法HotmasterTaq DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴增，可對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果，具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。

本產(chǎn)品含有獨立包裝參比染料50x ROX，用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差， 不同儀器所需ROX Reference Dye濃度不同，見下表。

操作步驟：(以ABI Step One Plus機型為測試機型)

1. 將DNA模板、引物、2 x SYBR qPCR Mix、ddH2O溶解并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應體系：（以20μl反應體系為例）

注意：

1） 推薦模板加樣量為1-2 μl / 20μl反應體系，cDNA原液≤總反應體系的10%，基因組DNA的量為10 - 100 ng。

因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同，可對模板進行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量。

2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM，就可以得到較好的結(jié)果，反應效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進行調(diào)整。擴增效率不高的情況下，可提高引物濃度；發(fā)生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應體系。

3） 舉例為常規(guī)PCR反應體系和反應程序，實際操作中應根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進行相應的改進和優(yōu)化。

3. qPCR反應程序

注意：

1） 本產(chǎn)品兼容性強，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。建議采用兩步法qPCR反應程序。一般來說，二步法擴增特異性高，三步法擴增效率高。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴增或提高退火溫度；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結(jié)果時，可嘗試加長延伸時間或者進行三步法PCR擴增。

2） 根據(jù)引物的Tm值進行退火&延伸（退火）溫度的設定；

3） 延伸（退火&延伸）時間的設置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整。

2x SYBR qPCR Mix（With 50x ROX）熒光定量